|
А. В. Шовковый, А. Т. Шеин, Ю. И. Лапкина Применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе комбинированного препарата “Таблетки Байкамин”В Государственном научном центре лекарственных средств (Харьков, Украина) разработан, прошел клинические испытания и разрешен ФК МЗ Украины к медицинскому применению препарат “Таблетки Байкамин” в качестве гипоазотемического средства [4]. Препарат представляет собой комбинацию аминокислот L-гистидина гидрохлорида, L-аргинина гидрохлорида и L-лизина байкалината, представляющего собой водорастворимую соль аминокислоты L-лизина и флавонового глюкуронида — байкалина, полученного из корней шлемника байкальского. Наличие в препарате трех действующих веществ повлекло за собой необходимость разработки метода анализа, который позволил бы провести определение действующих веществ в препарате. Таким методом на наш взгляд является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [2]. Цель работы — разработка методики анализа препарата “Таблетки Байкамин” с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматограффии. Большинство методик, приведенных в литературе по определению аминокислот методом ВЭЖХ основано на получении продуктов взаимодействия аминокислот с модифицирующими реагентами, такими как нингидрин [7], 2,4-динитро-1-фторбензол [3, 5], фталевый альдегид [6] с последующим хроматографированием полученных производных аминокислот. Однако использование модифицирующего реагента в нашем случае не целесообразно т. к. в смеси присутствует L-лизина байкалинат, наличие продуктов дериватизации которого значительно усложняет анализ. Поэтому было предложено проводить анализ без предварительной дериватизации аминокислот. Основная трудность при таком определении аминокислот связана с их детекцией [1], поскольку большинство аминокислот в УФ-области спектра имеют низкий коэффициент экстинкции и лишь в интервале длин волн 200–220 нм имеют значительное поглощение. Поэтому при разработке метода анализа нами использовалось детектирование при длине волны 210 нм. Объекты исследований: аминокислоты L-аргинин гидрохлорид, L-гистидин гидрохлорид моногидрат L-лизина байкалинат, а также препарат “Таблетки Байкамин”, в состав которого входят все вышеперечисленные вещества. Методика определения действующих веществ, основанная на методе ВЭЖХ, состоит в следующем.
По 5 мкл полученного раствора и раствора стандартного образца (СО) гистидина гидрохлорида моногидрата, аргинина гидрохлорида и L-лизина байкалината попеременно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором, получая не менее 5 хроматограмм для каждого из растворов, в следующих условиях: колонка размером 1 х 150 мм, заполненная сорбентом Силасорб С8, с размером частиц 10 мкм; подвижные фазы № 1 и № 2, дегазированные через фильтр ПОР-16 или любым удобным способом: № 1 — 0,001 М раствор калия фосфорнокислого однозамещенного, объем 1000 мкл; № 2 — 0,001 М раствор калия фосфорнокислого однозамещенного — спирт метиловый (70 : 30), объем 1500 мкл; скорость подвижной фазы 30 мкл/мин. температура колонки — 30оС; детектирование при длине волны 210 нм; масштаб регистрации 0,5 е. о. п; время интегрирования сигнала — 1,0 с. Содержание каждого из действующих веществ гистидина гидрохлорида моногидрата, или аргинина гидрохлорида, или L-лизина байкалината в одной таблетке вычисляли по полученной нами формуле: X = (S1 х m0 х Р х 200 х 25 х 10 S1 х m0 x P) / (S0 x 5 x 10 x 50 x 25 x 100 S0 x 125) где S1 — среднее значение площадей пиков каждого из действующих веществ (гистидина гидрохлорида моногидрата, аргинина гидрохлорида и L-лизина байкалината), вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора; S0 — среднее значение площадей пиков каждого из действующих веществ (гистидина гидрохлорида моногидрата, аргинина гидрохлорида или L-лизина байкалината), вычисленное из хроматограмм раствора СО; m0 — масса навески каждого из действующих веществ (гистидина гидрохлорида моногидрата, аргинина гидрохлорида или L-лизина байкалината), взятая для приготовления раствора СО, в граммах; Р — содержание основного вещества в СО гистидина гидрохлорида моногидрата, или аргинина гидрохлорида, или L-лизина байкалината; 5 — количество таблеток, взятых для анализа. Раствор СО гистидина гидрохлорида моногидрата, аргинина гидрохлорида и L-лизина байкалината готовили следующим образом. Около 0,06 г (точная навеска) СО гистидина гидрохлорида моногидрата, около 0,16 г (точная навеска) СО аргинина гидрохлорида и около 0,03 г (точная навеска) СО L-лизина байкалината помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 20 мл воды, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. В результате проведенной работы нами было достигнуто полное разделение действующих веществ, входящих в состав препарата. По полученным данным в ходе эксперимента нами были рассчитаны метрологические характеристики результатов (таблица 1), что позволило дать положительную оценку предложенной методике.
F - число степеней свободы; Хср - среднее значение Х; S2 - дисперсия; S - стандартное отклонение; S(х)ср. - стандартное отклонение среднего результата; Р - доверительная вероятность; t - критерий Стьюдента; DХср. - полуширина доверительного интервала среднего результата; e - относительное стандартное отклонение. Полученные величины относительного стандартного отклонения (e) не превышают 1%, что свидетельствует о высокой точности анализа и достоверности полученных результатов. Предложенная методика была апробирована на разных сериях лекарственной формы. При этом были получены результаты, соответствующие пределам, заложенным в научно-техническую документацию (НТД), и представленные в таблице 2.
ВыводРазработана методика количественного определения действующих веществ препарата “Таблетки Байкамин”. Методика включена в аналитически-техническую документацию на препарат (проект ВФС). Литература
© Провизор 1998–2022
|
Грипп. Прививка от гриппа
Нужна ли вакцинация?
Как и чем лечить кашель?
Безрецептурные лекарства при сухом и влажном кашле Устойчивость микробов к антибиотикам →
Помогает ли одежда из шелка лечить экзему?
Что лучше развивает ребёнка — книжки с картинками или с текстом? О безопасности автокресел для детей в возрасте от 4 до 12 лет
Аллергический ринит
Забеременеть в 40 Лечение бесплодия. Обзор существующих вариантов Аденома простаты. Как и чем лечить ? |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|