Логотип журнала "Провизор"








Привалова Э. Г., Никитюк В. Г.

Изучение группового и жирнокислотного состава препарата «Липохромин»

Государственный научный центр лекарственных средств, г. Харьков

Среди огромной номенклатуры современных профилактических и лекарственных средств особое место занимают препараты природного происхождения [1, 2, 3]. По своей фармакологической активности они, как правило, не уступают препаратам из полученных синтетическим путем индивидуальных соединений, а благодаря сбалансированному природой комплексу различных веществ они мягче действуют на организм человека, проявляя при этом минимум возможных побочных действий [4].

Важная роль среди лекарственных средств природного происхождения отводится комплексным препаратам, содержащим ряд биологически активных веществ липофильной природы. Среди этих соединений особый интерес с фармакотерапевтической точки зрения представляют каротиноиды, токоферолы, фитостеролы и ряд других веществ [4].

Основную часть природных липофильных комплексов составляют жирные кислоты [4]. При этом наибольшую биологическую активность проявляют ненасыщенные жирные кислоты, имеющие одну, две или несколько сопряженных двойных связей, которые в человеческом организме не синтезируются и встречаются только в растительных маслах и рыбьем жире [4, 5]. Являясь важными продуктами питания, находя широкое применение в технике и косметологии, они имеют немаловажное значение для медицины и фармации. Липиды играют столь же важную роль, как и белки, в построении и функционировании биологических мембран и в регуляции внутриклеточных процессов: они являются субстратами для построения фосфолипидного слоя клеточных мембран всего организма [6, 7], оказывают выраженный антисклеротический эффект [8, 9, 10] и заметное антитромбоцитарное действие [8, 9], проявляют витаминную активность и характеризуются как витамин F [4]. Не менее важна способность липидов значительно повышать биодоступность важных для организма липофильных веществ [4, 11, 12].

В ГНЦЛС был разработан новый лекарственный препарат — липохромин, представляющий собой растворенный в растительном масле липофильный комплекс из отходов переработки мякоти плодов шиповника вида Rosa canina. Препарат характеризуется высоким содержанием каротиноидов — не менее 800 мг% в пересчете на b-каротин.

Являясь по своей природе липофильными веществами, каротиноиды, тем не менее, в чистом виде растворяются в растительных маслах в незначительных количествах. Так, степень их растворимости в оливковом или подсолнечном маслах при комнатной температуре не превышает 0,2–0,3% и лишь при нагревании до 600С может увеличиться вдвое [11]. Примененные нами технологические приемы позволили получить масляный раствор, концентрация каротиноидов в котором может достигать 4-х и более процентов, а при их содержании до 1% раствор отличается высокой стабильностью и гомогенностью при длительном хранении. Столь чувствительное повышение растворимости достигается, по всей видимости, за счет компонентов, экстрагирующихся и переходящих в концентрат совместно с каротиноидами.

В этой связи значительный интерес представляет изучение химического состава веществ, содержащихся в липохромине.

Для определения группового и жирнокислотного состава веществ полученного нами комплекса использован кислотно-щелочной метод, разработанный специалистами проблемной лаборатории по использованию живых элементов дерева Лесотехнической академии (г. С.-Петербург, Россия) [13, 14, 15], схема которого представлена на рис. 1.

рис 1. Схема разделения экстрактивных веществ кислотно-щелочным методом
рис 1. Схема разделения экстрактивных веществ кислотно-щелочным методом

В качестве объекта исследования был использован нативный комплекс экстрактивных веществ после извлечения из измельченного и высушенного в щадящих условиях шрота мякоти плодов шиповника легколетучим растворителем и его отгонки. Сам шрот является отходом производства препаратов, содержащих гидрофильный комплекс биологически активных веществ (препарат «Холосас», сироп шиповника).

После разделения комплекса экстрактивных веществ на свободные кислоты и нейтральные вещества проводилась идентификация их состава и количественное определение групп веществ и индивидуальных соединений методами колоночной, тонкослойной (ТСХ) и газожидкостной (ГЖХ) хроматографии.

Для изучения индивидуального состава групп биологически активных веществ, обнаруженных в препарате, в дальнейшем использовали более подходящие методики из уже существующих.

Эти исследования представляются важными для определения направлений изучения фармакологической активности препарата, выбора оптимальной лекарственной формы (или форм), разработки методов анализа с целью проведения всего комплекса научно-исследовательских работ по созданию препарата, внедрения его в медицинскую практику и освоения промышленного выпуска.

Свободные кислоты, по данным исследований нескольких серий нативного комплекса, составляют 22–27% от суммы экстрактивных веществ. Методами тонкослойной хроматографии было установлено, что они представляют собой высшие жирные кислоты, состав которых определяли при помощи методов газожидкостной хроматографии. Для этого их метилировали метанолом в присутствии концентрированной серной кислоты и их метиловые эфиры идентифицировали на хроматографе с пламенно-ионизационным детектором. В качестве газа-носителя использован гелий, а неподвижной фазы — 20% полиэтиленгликоля сукцинат. Усредненные результаты идентификации жирнокислотного комплекса свободных кислот 3-х серий экстракта представлены в таблице 1.

Таблица 1 Состав свободных кислот липофильного комплекса плодов шиповника
№ п/п Kислоты Содержание, % от
суммы свободных кислот экстракта
1 Лауриновая 1,25 0,31
2 Миристиновая 1,00 0,25
3 Пальмитиновая 22,00 5,50
4 Стеариновая 25,50 6,38
5 Олеиновая 49,00 12,25
6 Линолевая 1,25 0,31
    100,00 25,0

Как видно из табл. 1, основными компонентами свободных кислот полученного нами комплекса являются пальмитиновая, стеариновая и олеиновая, содержание которых составляет 96% от их общей суммы (21,38% от экстрактивных веществ). Кроме того, наблюдается приблизительно равное соотношение насыщенных (лауриновая, миристиновая, пальмитиновая, стеариновая) и ненасыщенных (олеиновая, линолевая) жирных кислот.

Для установления группового состава нейтральных веществ применяли метод колоночной хроматографии. При этом в качестве сорбента использовали силикагель марки L (производства Чехии), а в качестве элюента — петролейный (ПЭ) и диэтиловый (ДЭ) эфиры. Для достижения максимально возможного разделения веществ природных комплексов в процессе хроматографирования увеличивали концентрацию более полярного растворителя — диэтилового эфира (от 0 до 100%). Контроль за разделением осуществляли при помощи методов тонкослойной хроматографии (ТСХ), используя такую же систему растворителей, что и при колоночной хроматографии. Проявление пятен на пластинках проводили йодом и концентрированной серной кислотой. Результаты разделения нейтральных веществ в колонке представлены в таблице 2.

Таблица 2 Состав фракций нейтральных веществ нативного комплекса шиповника по данным колоночной хроматографии
№ п/п Элюент ПЭ:ДЭ, % Содержание, % от Группы веществ
нейтральных веществ экстракта
1 2 3 4 5
1 100 : 0 19,0 14,2 Углеводороды
2 95 : 5 53,5 40,1 Сложные эфиры
3 92 : 8 10,0 7,5 Сложные эфиры
4 90 : 10 1,0 0,8 Спирты
5 85 : 15
80 : 20
3,5 2,7 Спирты
6 40 : 60
60 : 40
6,0 4,5 Стерины
7 0 : 100 7,0 5,2 ВМС и окисленные вещества

Фракцию 1 нейтральных веществ, содержащую по данным ТСХ (сравнение с эталонными образцами) алканы, сквален и каротиноиды, разделяли на фракции на колонке с силикагелем, импрегнированным добавкой 10% раствора нитрата серебра, что позволило отделить ненасыщенные соединения (каротиноиды) от насыщенных (парафины). Результаты разделения приведены в таблице 3.

Таблица 3 Состав фракции 1 нейтральных веществ
№ фракции Содержание, % от Группы веществ
фракции 1 нейтральных веществ экстракта
1 2 3 4 5
87,4 16,6 12,4 парафины
8,4 1,6 1,2 сквален
4,2 0,8 0,6 каротиноиды

Состав парафинов фракции 1А определяли методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) на хроматографе «Хром-4» с использованием стальной колонки. В качестве жидкой фазы использовали ХЕ-60. Как показали исследования, основную массу парафинов фракции составляли соединения С27–С31 (до 80% от суммы парафинов, или 6% от суммы экстрактивных веществ).

Фракции 2 и 3 по данным ТСХ представляли собой сложные эфиры. Для проведения более детального анализа их омыляли 0,5 Н раствором КОН в этаноле в течение 1 часа на водяной бане в колбе с обратным холодильником. Смесь охлаждали и разделяли на делительной воронке, куда предварительно наливали воду очищенную и эфир диэтиловый. При этом неомыляемые вещества переходили в диэтиловый эфир, а связанные кислоты — в водно-щелочной раствор. Эфирный раствор неомыляемых веществ промывали водой до рН = 7, фильтровали через слой безводного сульфата натрия для удаления остатков влаги, после чего растворитель отгоняли. Количество полученных таким образом связанных кислот составило около 75% от общего количества веществ фракций 2 и 3. Неомыляемых веществ — около 23%. Такое соотношение связанных кислот и неомыляемых веществ свидетельствует о том, что в выделенных группах веществ присутствовали триглицериды.

Суммарный состав связанных кислот фракций 2 и 3 определяли методом ГЖХ после их предварительного метилирования по той же методике, что и состав свободных кислот. Результаты представлены в таблице 4.

Таблица 4 Состав связанных кислот фракций 2 и 3 нейтральных веществ
№ фракции Состав жирных кислот Содержание, % от
суммы связанных кислот состава фракций 2 и 3 нейтральных веществ экстракта
1 2 3 4 5 6
А Kаприновая 0,9 0,7 0,44 0,33
В Лауриновая 3,0 2,2 1,40 1,05
С Миристиновая 1,8 1,3 0,83 0,62
D Пальмитиновая 8,2 6,1 3,87 2,90
E Стеариновая 62,0 46,5 29,53 22,13
F Олеиновая 19,7 14,8 9,40 7,04
G Линолевая 2,2 1,6 1,01 0,76
H Арахиновая 1,8 1,0 0,64 0,48
I Линоленовая 0,5 0,4 0,25 0,19
J Бегеновая 0,4 0,3 0,19 0,14

Состав связанных кислот фракций 2 и 3 оказался близок, но отличался наличием во фракции 2 каприновой кислоты, отсутствовавшей во фракции 3, и наличием во фракции 3 арахиновой и бегеновой кислот, отсутствовавших во фракции 2.

Неомыляемые вещества фракции 2 разделяли методом колоночной хроматографии на ряд более мелких фракций, различающихся по полярности. Как было установлено при помощи тонкослойной хроматографии, фракция 1А представляет собой невосстанавливаемую часть нейтральных веществ и состоит в основном из каротиноидов. Фракция 2В, судя по показателю Rf, содержала токоферолы, однако имела оранжевато-красную окраску, свидетельствующую о присутствии каротиноидов, из-за чего более точная идентификация используемыми методами не представлялась возможной. Во фракции 2С содержались стерины.

Аналогичным образом были идентифицированы связанные стерины фракции 3.

Суммарный состав неомыляемых веществ фракций 2 и 3, связанных с жирными кислотами, представлен в таблице 5.

Таблица 5 Состав неомыляемых веществ фракций 2 и 3
№ фракции Группы веществ Содержание, % от
суммы неомы-ляемых веществ фракций 2 и 3 суммы веществ фракций 2 и 3 нейтральных веществ экстракта
1 2 3 4 5 6
Kаротиноиды 40,0 9,2 5,84 4,38
Токоферолы и каротиноиды 21,2 4,9 3,10 2,32
Стерины 30,8 7,1 4,50 3,37
3 Стерины 8,0 1,8 1,17 0,88

Фракция 4 нейтральных веществ по данным ТСХ имела пятна, показатель Rf которых соответствовал эталонным метчикам спиртов нонаконазола-10 и изобиенола, однако не давал четкого представления об этих соединениях, так как пятна имели интенсивное оранжевое окрашивания из-за присутствия каротиноидов.

При исследовании методом ТСХ фракции 5 нейтральных веществ на пластинке с закрепленным слоем силуфола марки L появлялось одно расплывчатое пятно. После предварительного ацетилирования этой группы соединений смесью пиридина и уксусного альдегида оно разделялось на несколько пятен. При этом фракция 5А содержала каротиноиды, Rf пятна фракции 5В соответствовал ацетатам алифатических спиртов, уточнить состав которых из-за их малого количества не представлялось возможным. Фракция 5С содержала, возможно, стероиды и тритерпеновые спирты, но присутствие каротиноидов мешало более точному определению состава фракции. Групповой состав веществ фракции 5 приведен в таблице 6.

Таблица 6 Состав фракции 5 нейтральных веществ
№ фракции Группы веществ Содержание, % от
состава фракции нейтральных веществ экстракта
1 2 3 4 5
Kаротиноиды 14,0 0,49 0,36
Ацетаты алифатических спиртов 2,0 0,07 0,05
Предположительно сте-роиды, три-терпеновые спирты, каротиноиды 84,0 2,94 2,18

Фракция 6 нейтральных веществ по данным ТСХ содержит свободные стероидные соединения.

Определение состава веществ фракции 7 нейтральных веществ, содержащей по данным ТСХ высокомолекулярные соединения и окисленные вещества, нами не проводилось.

Выводы

В результате проведенных исследований группового и жирнокислотного состава высококаротиноидного липофильного комплекса мякоти плодов шиповника вида Rosa canina, полученного по разработанной нами технологии, было установлено, что значительная часть его состоит из свободных или связанных ненасыщенных жирных кислот (до 60% от общей суммы экстрактивных веществ), и прежде всего пальмитиновой стеариновой и олеиновой, на долю которых приходится свыше 90%от всего жирнокислотного состава.

Обнаружено, что кроме жирных кислот и каротиноидов, в полученном нами комплексе содержится еще ряд биологически активных веществ: стероиды, сквален, парафины, возможно присутствие токоферолов, а также некоторых других веществ, идентификация которых используемыми методами оказалась затруднительной. Применение этой методики также не позволило более точно идентифицировать фракционный состав комплексов каротиноидов, стероидов, токоферолов, для чего в дальнейшем нами были применены другие методы.

Значительное содержание биологически активных веществ свидетельствует о возможности широкого спектра фармакотерапевтической активности препарата, учитывая их известную направленность действия при различных патологических процессах, а также для поддержания нормального протекания ряда физиологических и биохимических процессов в здоровом организме.

Можно также считать подтвержденным предположение, что столь высокая концентрация каротиноидов в Липохромине получена благодаря наличию комплекса других экстрактивных веществ,в частности жирных кислот, которые могут образовывать с каротиноидами легко растворимые в растительных маслах сложные эфиры.

Литература

  1. Лекарственные препараты в России. Справочник Видаль.— М., 1998.
  2. Фарминдекс-97 — лекарственные препараты.— К., 1998.
  3. Машковский М. Д. Лекарственные средства: в 2-х томах.— М.: Медицина, 1995.
  4. Лікарські рослини: Енциклопедичний довідник/Відп. ред. А. М. Гродзінський.— К.: Голов. ред. УРЕ, 1991.— 544 с.
  5. Липиды в лекарственных препаратах/В. И. Швец, Ю. М. Краснопольский//Хим. фарм. журнал.— 1987.— № 1.— С. 17–26.
  6. Straub P. W. Fischtran oder die Relativitat des Fortchritts//Schweiz. med. Wschr.— 1989.— Bd. 119.— № 27–28.— S. 963–964.
  7. Роль нарушений свойств липидного слоя мембран в развитии патологических процессов/Ю. А. Владимиров//Патологическая физиол. и экспер. терапия.— М.: Медицина, 1989.— № 4.— C. 7–17.
  8. Osterud B., Hansen J.-B. Fatty acids, platelets and monocytes. Something to do with atherogenesis//Ann. Med.— 1989.— Vol. 21.— № 1.— P. 47–51.
  9. Ziegler O., Got I., Jan Ph., Drouin P. Traitement dietetique des hypercholesterolemies. De la theorie a la pratique//Ann. Cardiol. Angeiol.— 1989.— Vol. 38.— № 5.— P. 245–253.
  10. Ziegler O., Got I., Jan Ph., Drouin P. Traitement dietetique des hypercholesterolemies. De la theorie a la pratique//Ann. Cardiol. Angeiol.— 1989.— Vol. 38.— № 5.— P. 245–253.
  11. Кудрицкая С. Е. Каротиноиды плодов и ягод — К.: Вища школа, 1990.— 221 с.
  12. Надиров Н. К. Токоферолы — биологически активные вещества.— М.: Знание, 1981.— 64 с.
  13. Ягодин В. И. Основы химии и технологии переработки древесины зелени. Л., 1981.— 224 с.
  14. Павлуцкая И. С., Рощин В. И. Состав эфиров хлорофиллокаротиноидной пасты//Химия древесины.— 1987.— № 3.— С. 102–109.
  15. Pavlutskaya I. S., Rostchin V. I. Composition of chlorophyll-carotene paste obtained from Pine foliage fraction//Harvesting and utilization of tree foliage.— Meeting, Riga, 1989.— P. 155–165.




© Провизор 1998–2017



Грипп у беременных и кормящих женщин
Актуально о профилактике, тактике и лечении

Грипп. Прививка от гриппа
Нужна ли вакцинация?
















Крем от морщин
Возможен ли эффект?
Лечение миомы матки
Как отличить ангину от фарингита






Журнал СТОМАТОЛОГ



џндекс.Њетрика