Логотип журнала "Провизор"








Литвинова Е. В.

Исследование иммуномодулирующей активности ферментного гидролизата Lactobacillus bulgaricus в условиях in vitro

Государственный научный центр лекарственных средств, г. Харьков

Большая распространенность заболеваний печени и гепатобилиарной системы диктует необходимость создания новых более эффективных лекарственных препаратов с гепатопротекторной активностью. Известно, что при лечении указанных заболеваний применяется комбинированная фармакотерапия. Оценивая результаты фундаментальных исследований в биологии и медицине, работы передовых отечественных и зарубежных школ в области гепатологии, можно сделать вывод о перспективности внедрения иммуномодулирующих методов лечения заболеваний печени. Так, при обострении хронического гепатита, цирроза печени и в ряде других случаев, протекающих с нарушением кооперативной функции иммунокомпетентных клеток, ослаблением активности факторов неспецифической резистентности, необходима иммунокоррекция [1]. Литературные данные свидетельствуют о наличии иммуномодулирующих свойств у ряда гепатопротекторных препаратов, что является дополнительным положительным эффектом их действия. На основании вышесказанного актуальным является исследование иммунобиологических свойств у гепатопротекторных препаратов.

Цель данной работы — изучение влияния ферментного гидролизата стенок штамма Lactobacillus bulgaricus (ФГ), который, по ранее полученным нами экспериментальным данным, обладал гепатопротекторной активностью, на антителогенез в условиях in vitro при вторичном иммунном ответе.

Материалы и методы исследования

Опыты проведены на первичной культуре спленоцитов мышей линии СВА. В качестве антигена использовали эритроциты барана (ЭБ). Для получения указанной культуры мышей иммунизировали ЭБ в дозе 2 х 108. Реиммунизацию животных проводили на 21-е сут., используя ту же дозу антигена. На 10-й день после реиммунизации получали спленоцитарную культуру клеток 5 х 106 в 1 мл [2], которую затем культивировали в культуральных чашках Петри в течение 4 суток при 37°С в атмосфере 7% O2, 10% CO2, 83% N2. Для культивирования клеток использовали питательную среду, состоящую из RPMI-1640 с 1% пенициллина, 1% стрептомицина, 1% пирувата натрия, 5 х 10-5 М 2-меркаптоэтанола, 1% L-глутамина, 2% 50-кратного концентрата аминокислот, 5% эмбриональной телячьей сыворотки [3]. Стерилизацию полной питательной среды проводили фильтрованием через мембранный фильтр с размером пор 0,22 mm («Millex®-GS», США). Затем добавляли ЭБ до конечной концентрации 0,03%. Культивирование проводили при значении рН — 7,4, которое, по ранее полученным нами экспериментальным данным, являлось оптимальным. В течение инкубации в каждую чашку ежедневно добавляли питательную смесь («подкормку») для восполнения усвоенных клетками компонентов [3]. ФГ исследовали в следующих дозах: 1,8, 3,6 и 7,2 мкг/мл, для чего поставлено 4 серии опытов (по 6 культуральных чашек в каждой): 3 серии с препаратом и 1 контроль.

О росте клеток судили по их концентрации в культуральной жидкости после ресуспендирования. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью 0,2% раствора трипанового синего. Принцип данного метода основан на способности проникновения красителя лишь в клетки с поврежденной мембраной, которые регистрировали микроскопически [4]. Количество антителообразующих клеток (АОК) определяли с помощью метода непрямого локального гемолиза в геле [2] через 96 ч после начала культивирования. Результаты представляли, как это принято в виде относительного количества АОК на 106 жизнеспособных клеток (АОК/106) [5].

Результаты исследований и их обсуждение

Результаты по изучению токсичности и иммуномодулирующей активности ФГ представлены в таблице.

Результаты влияния ФГ на иммунобиологические показатели в условиях in vitro
Группы С, млн/мл Жизнеспособные клетки, % АОK/106
Kонтроль 6,22 ± 0,2 44,7 ± 1,98 1005 ± 50,2
ФГ, в дозе 1,8 мкг/мл 6,12 ± 0,14 р > 0,05 42,2 ± 1,17 р > 0,05 1170 ± 90,74 р > 0,05
ФГ, в дозе 3,6 мкг/мл 6,33 ± 0,11 р > 0,05 46,3 ± 2,56 р > 0,05 1238 ± 55,4 р < 0,05
ФГ, в дозе 7,2 мкг/мл 6,38 ± 0,13 р > 0,05 42,3 ± 1,28 р > 0,05 2325 ± 17,06 р < 0,05

Примечание: С - концентрация клеток в культуральной среде, р - сравнение данных опытных и контрольной групп.

Анализ приведенных данных свидетельствует о том, что ФГ в дозах: 1,8, 3,2 и 7,2 мкг/мл не вызывает достоверных изменений роста клеток и их жизнеспособности по сравнению с контролем. Таким образом, ФГ не оказывает токсического воздействия на культивируемые клетки.

Как следует из представленных данных, ФГ в дозе 1,8 мкг/мл не вызывает достоверных изменений по сравнению с контролем в формировании АОК. При введении в культуральную среду ФГ в дозах 3,6 и 7,2 мкг/мл наблюдается достоверное увеличение количества АОК на 23,2 и 131,3% соответственно. Следовательно, можно сделать вывод о способности ФГ в дозах: 3,6 и 7,2 мкг/мл индуцировать антителопродукцию в условиях in vitro.

Таким образом, при исследовании ФГ с использованием спленоцитарной культуры наблюдали прямую корреляцию между формированием количества АОК и исследуемой дозой (r = 0,97, высокая степень). Можно предположить, что механизм действия ФГ связан с выработкой под его влиянием цитокинов, усиливающих процесс созревания В-лимфоцитов в АОК, либо он сам обладает свойствами модуляции эффекторных клеток. С другой стороны, эффект действия ФГ возможно связан с повышением под его влиянием чувствительности клеток к лимфокинам, что может реализоваться посредством увеличения плотности соответствующих рецепторов [7].

Таким образом, на основании проведенных исследований можно сделать вывод иммунотропном действии ФГ. Выявленные свойства свидетельствуют об эффективности исследуемого препарата при лечении заболеваний печени.

Литература

  1. Логинов А. С., Царегородцева Т. М. Зотина М. М. Иммунная система и болезни органов пищеварения.— М.: Медицина, 1986.— 256 с.
  2. Иммунологические методы/Под ред. Г. Фримеля: Пер. с нем. А. П. Тарасова. М.: Медицина, 1987.— 427 с.
  3. Иммунологические методы исследований/Под ред. И. Лефковитса, Б. Парнаса: Пер. с англ.— М.: Мир, 1988.— 530 с.
  4. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник/Под ред. В. В. Меньшикова.— М.: Медицина, 1987.— 368 с.
  5. Петров Р. В., Хаитов P. M. Контроль и регуляция иммунного ответа.— Л.: Медицина, 1981.— 312 с.
  6. Антитела. Методы: в 2-х кн. Кн. 2: Пер. с англ./под ред. Д. Кэтти.— М.: Мир, 1991.— 384 с.
  7. Покровский В. И., Лебедев В. В., Шелепова Т. М. и др. Имунофан-пептидный препарат нового поколения в лечении инфекционных и онкологических заболеваний: свойства, область применения//Практикующий врач.— 1998.— № 12.— С. 14–16.




© Провизор 1998–2017



Грипп у беременных и кормящих женщин
Актуально о профилактике, тактике и лечении

Грипп. Прививка от гриппа
Нужна ли вакцинация?
















Крем от морщин
Возможен ли эффект?
Лечение миомы матки
Как отличить ангину от фарингита






Журнал СТОМАТОЛОГ



џндекс.Њетрика