|
Литвинова Е. В. Исследование иммуномодулирующей активности ферментного гидролизата Lactobacillus bulgaricus в условиях in vitroГосударственный научный центр лекарственных средств, г. Харьков Большая распространенность заболеваний печени и гепатобилиарной системы диктует необходимость создания новых более эффективных лекарственных препаратов с гепатопротекторной активностью. Известно, что при лечении указанных заболеваний применяется комбинированная фармакотерапия. Оценивая результаты фундаментальных исследований в биологии и медицине, работы передовых отечественных и зарубежных школ в области гепатологии, можно сделать вывод о перспективности внедрения иммуномодулирующих методов лечения заболеваний печени. Так, при обострении хронического гепатита, цирроза печени и в ряде других случаев, протекающих с нарушением кооперативной функции иммунокомпетентных клеток, ослаблением активности факторов неспецифической резистентности, необходима иммунокоррекция [1]. Литературные данные свидетельствуют о наличии иммуномодулирующих свойств у ряда гепатопротекторных препаратов, что является дополнительным положительным эффектом их действия. На основании вышесказанного актуальным является исследование иммунобиологических свойств у гепатопротекторных препаратов. Цель данной работы — изучение влияния ферментного гидролизата стенок штамма Lactobacillus bulgaricus (ФГ), который, по ранее полученным нами экспериментальным данным, обладал гепатопротекторной активностью, на антителогенез в условиях in vitro при вторичном иммунном ответе. Материалы и методы исследованияОпыты проведены на первичной культуре спленоцитов мышей линии СВА. В качестве антигена использовали эритроциты барана (ЭБ). Для получения указанной культуры мышей иммунизировали ЭБ в дозе 2 х 108. Реиммунизацию животных проводили на 21-е сут., используя ту же дозу антигена. На 10-й день после реиммунизации получали спленоцитарную культуру клеток 5 х 106 в 1 мл [2], которую затем культивировали в культуральных чашках Петри в течение 4 суток при 37°С в атмосфере 7% O2, 10% CO2, 83% N2. Для культивирования клеток использовали питательную среду, состоящую из RPMI-1640 с 1% пенициллина, 1% стрептомицина, 1% пирувата натрия, 5 х 10-5 М 2-меркаптоэтанола, 1% L-глутамина, 2% 50-кратного концентрата аминокислот, 5% эмбриональной телячьей сыворотки [3]. Стерилизацию полной питательной среды проводили фильтрованием через мембранный фильтр с размером пор 0,22 mm («Millex®-GS», США). Затем добавляли ЭБ до конечной концентрации 0,03%. Культивирование проводили при значении рН — 7,4, которое, по ранее полученным нами экспериментальным данным, являлось оптимальным. В течение инкубации в каждую чашку ежедневно добавляли питательную смесь («подкормку») для восполнения усвоенных клетками компонентов [3]. ФГ исследовали в следующих дозах: 1,8, 3,6 и 7,2 мкг/мл, для чего поставлено 4 серии опытов (по 6 культуральных чашек в каждой): 3 серии с препаратом и 1 контроль. О росте клеток судили по их концентрации в культуральной жидкости после ресуспендирования. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью 0,2% раствора трипанового синего. Принцип данного метода основан на способности проникновения красителя лишь в клетки с поврежденной мембраной, которые регистрировали микроскопически [4]. Количество антителообразующих клеток (АОК) определяли с помощью метода непрямого локального гемолиза в геле [2] через 96 ч после начала культивирования. Результаты представляли, как это принято в виде относительного количества АОК на 106 жизнеспособных клеток (АОК/106) [5]. Результаты исследований и их обсуждениеРезультаты по изучению токсичности и иммуномодулирующей активности ФГ представлены в таблице.
Анализ приведенных данных свидетельствует о том, что ФГ в дозах: 1,8, 3,2 и 7,2 мкг/мл не вызывает достоверных изменений роста клеток и их жизнеспособности по сравнению с контролем. Таким образом, ФГ не оказывает токсического воздействия на культивируемые клетки. Как следует из представленных данных, ФГ в дозе 1,8 мкг/мл не вызывает достоверных изменений по сравнению с контролем в формировании АОК. При введении в культуральную среду ФГ в дозах 3,6 и 7,2 мкг/мл наблюдается достоверное увеличение количества АОК на 23,2 и 131,3% соответственно. Следовательно, можно сделать вывод о способности ФГ в дозах: 3,6 и 7,2 мкг/мл индуцировать антителопродукцию в условиях in vitro. Таким образом, при исследовании ФГ с использованием спленоцитарной культуры наблюдали прямую корреляцию между формированием количества АОК и исследуемой дозой (r = 0,97, высокая степень). Можно предположить, что механизм действия ФГ связан с выработкой под его влиянием цитокинов, усиливающих процесс созревания В-лимфоцитов в АОК, либо он сам обладает свойствами модуляции эффекторных клеток. С другой стороны, эффект действия ФГ возможно связан с повышением под его влиянием чувствительности клеток к лимфокинам, что может реализоваться посредством увеличения плотности соответствующих рецепторов [7]. Таким образом, на основании проведенных исследований можно сделать вывод иммунотропном действии ФГ. Выявленные свойства свидетельствуют об эффективности исследуемого препарата при лечении заболеваний печени. Литература
© Провизор 1998–2022
|
Грипп. Прививка от гриппа
Нужна ли вакцинация?
Как и чем лечить кашель?
Безрецептурные лекарства при сухом и влажном кашле Устойчивость микробов к антибиотикам →
Помогает ли одежда из шелка лечить экзему?
Что лучше развивает ребёнка — книжки с картинками или с текстом? О безопасности автокресел для детей в возрасте от 4 до 12 лет
Аллергический ринит
Забеременеть в 40 Лечение бесплодия. Обзор существующих вариантов Аденома простаты. Как и чем лечить ? |
||||||||||||||||||||
|