Логотип журнала "Провизор"








Лысоченко Л. М., Котов А. Г., Подпружников Ю. В., Гладченко С. В.

Разработка методов стандартизации препаратов эхинацеи

Государственный научный центр лекарственных средств, г. Харьков

Введение

В последнее время определенную популярность приобрели фитопрепараты, включающие в состав эхинацею пурпурную — Echinacea purpurea Moench сем. Asteraceae. Это связано с тем, что препараты эхинацеи оказывают лечебное действие при различных по своему характеру патологических состояниях за счет повышения естественных защитных сил организма [1–3]. Большинство авторов связывают фармакологическое действие эхинацеи с наличием водорастворимой фракции полисахаридов и липофильной, основную часть которой составляют ненасыщенные алкиламиды [1–5].

По данным литературы, в состав эхинацеи входят различные классы химических соединений: полисахариды и сахара, производные кофейной кислоты (содержание цикориевой кислоты — 0,6–2,1%), фенольные соединения (флавоноиды, дубильные вещества пирокатехиновой природы — 5,56–5,67%), эфирные масла (0,01–0,24%), ненасыщенные алкиламиды (изобутиламиды — 0,0004–0,039%) и др. [2–6]. Поэтому подходы к стандартизации как растительного сырья, так и препаратов эхинацеи у разных авторов различны.

Российские исследователи в работе [7] предлагают модифицированную методику количественного определения содержания гидроксикоричных кислот (в пересчете на цикориевую кислоту) в надземной части эхинацеи пурпурной. Авторы ссылаются на литературные источники, где указано, что именно цикориевая кислота, а также полисахариды обладают антимикробным и иммуностимулирующим действием. В работе [2] авторы в обсуждении стандартизации препаратов эхинацеи описывают идентификацию настойки корня эхинацеи пурпурной методом ТСХ по наличию изобутиламидов высших полиненасыщенных кислот в системе циклогексан — эфир — метанол (7:2:1), в качестве веществ сравнения используют тимол, анетол, пирокатехин.

Вероятнее всего, биологическая активность препаратов эхинацеи обусловлена синергетическим действием всех указанных классов соединений, поскольку не всегда подтверждается действие на иммунную систему выделенного в чистом виде полисахаридного комплекса, липофильной фракции растения и т. д. [2, 3]

Цель настоящей работы — представить результаты аналитических исследований по стандартизации настойки из корней и корневищ эхинацеи пурпурной.

Экспериментальная часть и обсуждение полученных результатов

При выборе класса веществ для стандартизации настойки из корней и корневищ эхинацеи пурпурной мы руководствовались следующими соображениями: в корнях эхинацеи пурпурной в достаточно большом количестве содержится полисахарид инулин [8]. Предварительные исследования химического состава настойки эхинацеи показали, что он присутствует в препарате в достаточных количествах для стандартизации. В связи с этим в тесте «Подлинность» в дополнение к хорошо известной реакции, основанной на свойстве полисахаридов выпадать в осадок в водных растворах при избытке спирта 96% [9], методом ТСХ идентифицировали фруктан — инулин и фруктозу. Свой выбор мы остановили на пластинках «Kieselgur F254», рекомендованных в литературе для деления сахаров [10]. В процессе разработки методики были опробованы несколько систем с различными растворителями: изопропанол — этилацетат — вода (6:1:3); изопропанол — этилацетат — вода (3:1:3); 50% этанол — этилацетат (5:1); 70%; 60%; 55%; 50% этанол. Сложность выбора системы была обусловлена необходимостью разделения фруктозы и полисахарида, состоящего из 34–35 звеньев D-фруктозы В качестве оптимальной системы был выбран 55% этанол. Для проявления пятен хроматограмму последовательно обрабатывали растворами резорцина и кислоты серной разведенной, затем нагревали при температуре 1000С. В качестве стандартного образца вещества-свидетеля используется только фруктоза, так как инулин, полученный из различных источников, дает плохо воспроизводимые результаты. В процессе разработки методики мы использовали образец инулина, выделенный сотрудниками ГНЦЛС. В АНД нормировали только интервал Rf инулина, полученный в результате исследований разных серий настойки эхинацеи. На хроматограмме препарата пятно, соответствующее инулину, находится непосредственно над пятном, соответствующим фруктозе. В процессе эксперимента на хроматографическую пластинку параллельно с пробами препарата (непосредственно настойки), стандартного образца фруктозы и инулина наносили также фракцию полисахаридов, полученную в разделе «Количественное определение». Пятно на хроматограмме препарата находилось на одном уровне с пятном образца инулина и пятном на хроматограмме выделенной полисахаридной фракции, что позволило с достаточной степенью надежности идентифицировать инулин (Rf в интервале 0,80–0,87) в настойке эхинацеи.

Сырье — корневища с корнями эхинацеи пурпурной — по ВФС 42У-44-193-96 стандартизуется по наличию изобутиламидов высших полиненасыщенных кислот методом ТСХ. Методику, с использованием аналогичных условий, для идентификации изобутиламидов в настойке эхинацеи, мы считаем нецелесообразным включать в аналитическую нормативную документацию (АНД) на препарат, поскольку нет четкого деления хроматографических зон с воспроизводимыми пределами Rf. По-видимому, это связано с незначительным содержанием алкиламидов в самом сырье и, соответственно, в настойке, при этом отсутствуют какие-либо стандарты или ссылки на значения Rf идентифицируемых соединений.

Количественное определение инулина в настойке проводили спектрофотометрическим методом по поглощению продуктов взаимодействия фруктозы, образовавшейся после расщепления инулина, с резорцином в кислой среде [11]. Для определения содержания именно инулина предварительно была проведена процедура извлечения полисахаридов: осаждение с последующим растворением в воде. В качестве стандарта была выбрана фруктоза, исходя из соображений, изложенных выше. Спектры поглощения продуктов реакции взаимодействия раствора препарата с резорцином в кислой среде и раствора стандартного образца фруктозы практически идентичны. Расчет содержания инулина в препарате проводится по удельному показателю поглощения продуктов реакции взаимодействия фруктозы с резорцином, экспериментально установленному и совпадающему с данными литературы (с поправкой на то, что приведенный в работе [11] удельный показатель рассчитан без учета последнего разведения). Метрологические характеристики методики представлены в табл. 1. На основании проведенных исследований содержание инулина в настойке из корней эхинацеи пурпурной нормируется — не менее 0,1%.

Табл. 1. Метрологические характеристики методики количественного определения инулина, в пересчете на фруктозу, в настойке эхинацеи пурпурной

№ опыта

Содержание инулина в препарате, %

1

0,2421

2

0,2492

3

0,2495

4

0,2563

5

0,2602

Метрологические характеристики

Х

0,2515

S

7,01 х 10-3

DХ

8,71 х 10-3

e,%

3,46

В результате исследований по определению гидроксикоричных кислот в настойке из корня и корневищ эхинацеи пурпурной после предварительного удаления липофильной части установили, что их содержание в пересчете на цикориевую кислоту (удельный показатель поглощения взят из работы [7]) составило около 0,3%. Однако оптимизация данной методики для включения в АНД без стандартного образца цикориевой кислоты в настоящее время невозможна. Использовать же в данном случае в качестве стандарта другие доступные кислоты (хлорогеновую, коричную) некорректно.

С целью максимально объективной стандартизации сырья эхинацеи и препаратов на ее основе исследования по количественному определению других соединений, обуславливающих биологическую активность, будут продолжены.

Выводы

В результате проведенных исследований подобраны оптимальные условия для идентификации инулина и фруктозы в настойке эхинацеи методом тонкослойной хроматографии. Предложена объективная методика определения количественного содержания инулина в настойке из корня и корневищ эхинацеи пурпурной. Разработанные методики введены в нормативно-аналитическую документацию.

Литература

  1. Бакуридзе А. Д., Курцикидзе М. Ш., Писарев В. М., Махарадзе Р. В., Берашвили Д. Т. Иммуномодуляторы растительного происхождения (обзор)//Химико-фармацевтический журнал.— 1993.— № 8.— с. 43–46.
  2. Середа А. В., Моисеева Г. Ф. Биологически активные вещества и стандартизация лекарственных растений рода Echinacea//Фармаком.— 1998.— № 3.— с. 13–23.
  3. Самородов В. Н., Поспелов С. В., Моисеева Г. Ф., Середа А. В. Фитохимический состав представителей рода эхинацея (Echinacea Moench.) и его фармакологические свойства (обзор)//Химико-фармацевтический журнал.— 1996.— № 4.— с. 32–37.
  4. Котов А. Г., Комиссаренко Н. Ф., Овдиенко О. А., Стукан В. Г. Кумарины Echinacea purpureae Moench//Фармаком.— 1996.— № 4/5.— с. 50–51.
  5. Wagner H., Proksch A., Riess-Maurer I. et. al. Immunstimulierend wirkende Polysaccharide (Heteroglykane) aus hоheren Pflanzen//Arzneimittel Forsch./Drug Reseach, 35 (II), 1985, Nr 7, 1069–1075.
  6. Мамчур Ф. I., Зузук Б.М., Василишин А. А. Хiмiчний склад i фармакологiчнi властивостi рослин роду Echinacea (Asteraceae)//Фармацевтичний журнал.— 1993.— № 2.— с. 38–41.
  7. Куркин В. А., Авдеева О. И., Авдеева Е. В., Мизина П. Г. Количественное определение суммы гидроксикоричных кислот в надземной части Echinacea purpurea (L.) Moench//Растительные ресурсы.— 1998.— т. 34.— вып. 2.
  8. Bauer R., Wagner H. Echinacea Handbuch fur Arzte, Apotheker und andere Naturwissen, Schaftler, Stuttgsrt.— 1990.— p. 182.
  9. Государственная фармакопея СССР/МЗ СССР.— 11-е изд., доп.— М.: Медицина, 1987.— Вып. 2.
  10. Хроматография в тонких слоях/Под ред. Шталя Э.— 1965, 508 с.
  11. Беляков К. В., Попов Д. М. Определение инулина в корневищах и корнях девясила высокого (Inula helenium)//Фармация.— 1998.— № 1.— с. 34–36.




© Провизор 1998–2017



Грипп у беременных и кормящих женщин
Актуально о профилактике, тактике и лечении

Грипп. Прививка от гриппа
Нужна ли вакцинация?
















Крем от морщин
Возможен ли эффект?
Лечение миомы матки
Как отличить ангину от фарингита






Журнал СТОМАТОЛОГ



џндекс.Њетрика