Логотип журнала "Провизор"








А. В. Шовковый, А. Т. Шеин, Ю. И. Лапкина

Применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе комбинированного препарата “Таблетки Байкамин”

В Государственном научном центре лекарственных средств (Харьков, Украина) разработан, прошел клинические испытания и разрешен ФК МЗ Украины к медицинскому применению препарат “Таблетки Байкамин” в качестве гипоазотемического средства [4].

Препарат представляет собой комбинацию аминокислот L-гистидина гидрохлорида, L-аргинина гидрохлорида и L-лизина байкалината, представляющего собой водорастворимую соль аминокислоты L-лизина и флавонового глюкуронида — байкалина, полученного из корней шлемника байкальского.

Наличие в препарате трех действующих веществ повлекло за собой необходимость разработки метода анализа, который позволил бы провести определение действующих веществ в препарате. Таким методом на наш взгляд является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [2].

Цель работы — разработка методики анализа препарата “Таблетки Байкамин” с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматограффии.

Большинство методик, приведенных в литературе по определению аминокислот методом ВЭЖХ основано на получении продуктов взаимодействия аминокислот с модифицирующими реагентами, такими как нингидрин [7], 2,4-динитро-1-фторбензол [3, 5], фталевый альдегид [6] с последующим хроматографированием полученных производных аминокислот.

Однако использование модифицирующего реагента в нашем случае не целесообразно т. к. в смеси присутствует L-лизина байкалинат, наличие продуктов дериватизации которого значительно усложняет анализ. Поэтому было предложено проводить анализ без предварительной дериватизации аминокислот.

Основная трудность при таком определении аминокислот связана с их детекцией [1], поскольку большинство аминокислот в УФ-области спектра имеют низкий коэффициент экстинкции и лишь в интервале длин волн 200–220 нм имеют значительное поглощение. Поэтому при разработке метода анализа нами использовалось детектирование при длине волны 210 нм.

Объекты исследований: аминокислоты L-аргинин гидрохлорид, L-гистидин гидрохлорид моногидрат L-лизина байкалинат, а также препарат “Таблетки Байкамин”, в состав которого входят все вышеперечисленные вещества.

Методика определения действующих веществ, основанная на методе ВЭЖХ, состоит в следующем.

5 таблеток, предварительно растертых в порошок, количественно при помощи 20 мл воды переносят в мерную колбу вместимостью 200 мл перемешивают в течение 5 мин. и доводят объем раствора водой до метки.
20 мл полученного раствора центрифугируют со скоростью вращения 8000 об./мин. в течение 5 мин. (раствор А).
10 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

По 5 мкл полученного раствора и раствора стандартного образца (СО) гистидина гидрохлорида моногидрата, аргинина гидрохлорида и L-лизина байкалината попеременно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором, получая не менее 5 хроматограмм для каждого из растворов, в следующих условиях: колонка размером 1 х 150 мм, заполненная сорбентом Силасорб С8, с размером частиц 10 мкм; подвижные фазы № 1 и № 2, дегазированные через фильтр ПОР-16 или любым удобным способом: № 1 — 0,001 М раствор калия фосфорнокислого однозамещенного, объем 1000 мкл; № 2 — 0,001 М раствор калия фосфорнокислого однозамещенного — спирт метиловый (70 : 30), объем 1500 мкл; скорость подвижной фазы 30 мкл/мин. температура колонки — 30оС; детектирование при длине волны 210 нм; масштаб регистрации 0,5 е. о. п; время интегрирования сигнала — 1,0 с.

Содержание каждого из действующих веществ гистидина гидрохлорида моногидрата, или аргинина гидрохлорида, или L-лизина байкалината в одной таблетке вычисляли по полученной нами формуле:

X = (S1 х m0 х Р х 200 х 25 х 10 S1 х m0 x P) / (S0 x 5 x 10 x 50 x 25 x 100 S0 x 125)

где S1 — среднее значение площадей пиков каждого из действующих веществ (гистидина гидрохлорида моногидрата, аргинина гидрохлорида и L-лизина байкалината), вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора;

S0 — среднее значение площадей пиков каждого из действующих веществ (гистидина гидрохлорида моногидрата, аргинина гидрохлорида или L-лизина байкалината), вычисленное из хроматограмм раствора СО;

m0 — масса навески каждого из действующих веществ (гистидина гидрохлорида моногидрата, аргинина гидрохлорида или L-лизина байкалината), взятая для приготовления раствора СО, в граммах;

Р — содержание основного вещества в СО гистидина гидрохлорида моногидрата, или аргинина гидрохлорида, или L-лизина байкалината;

5 — количество таблеток, взятых для анализа.

Раствор СО гистидина гидрохлорида моногидрата, аргинина гидрохлорида и L-лизина байкалината готовили следующим образом. Около 0,06 г (точная навеска) СО гистидина гидрохлорида моногидрата, около 0,16 г (точная навеска) СО аргинина гидрохлорида и около 0,03 г (точная навеска) СО L-лизина байкалината помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 20 мл воды, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

В результате проведенной работы нами было достигнуто полное разделение действующих веществ, входящих в состав препарата.

По полученным данным в ходе эксперимента нами были рассчитаны метрологические характеристики результатов (таблица 1), что позволило дать положительную оценку предложенной методике.

Таблица 1 Метрологические характеристики определения действующих веществ препарата «Байкамин»
Действующие вещества Метрологические характеристики
f Xср S2 S S(x)ср Р,% t(р,f) dXср e,%
L-гистидина гидрохлорид 5 0,509 2,1 х 10-5 4,5 х 10-3 1,9 х 10-3 95 2,57 4,8 х 10-3 ±0,9
L-аргинина гидрохлорид 5 0,123 1,4 х 10-6 1,2 х 10-3 4,8 х 10-4 95 2,57 1,2 х 10-3 ±1,0
L-лизина байкалин 5 0,269 4,3 х 10-6 2,1 х 10-3 8,4 х 10-4 95 2,57 2,2 х 10-3 ±0,8

F - число степеней свободы; Хср - среднее значение Х; S2 - дисперсия; S - стандартное отклонение; S(х)ср. - стандартное отклонение среднего результата; Р - доверительная вероятность; t - критерий Стьюдента; DХср. - полуширина доверительного интервала среднего результата; e - относительное стандартное отклонение.

Полученные величины относительного стандартного отклонения (e) не превышают 1%, что свидетельствует о высокой точности анализа и достоверности полученных результатов.

Предложенная методика была апробирована на разных сериях лекарственной формы. При этом были получены результаты, соответствующие пределам, заложенным в научно-техническую документацию (НТД), и представленные в таблице 2.

Таблица 2 Результаты анализа различных серий лекарственной формы «Tаблетки Байкамин»
  Номер серии препарата «Таблетки Байкамин» Содержание вещества в лекарственной форме согласно НТД, г/мл Найдено вещества, г/мл
Гистидинa гидрохлорид 010195 0,046 - 0,054 0,050
020195 0,046 - 0,054 0,053
030195 0,046 - 0,054 0,050
040195 0,046 - 0,054 0,052
050195 0,046 - 0,054 0,054
Аргининa гидрохлорид 010195 0,118 - 0,130 0,125
020195 0,118 - 0,130 0,121
030195 0,118 - 0,130 0,129
040195 0,118 - 0,130 0,122
050195 0,118 - 0,130 0,124
L-лизина байкалинат 010195 0,024 - 0,028 0,026
020195 0,024 - 0,028 0,027
030195 0,024 - 0,028 0,025
040195 0,024 - 0,028 0,026
050195 0,024 - 0,028 0,026

Вывод

Разработана методика количественного определения действующих веществ препарата “Таблетки Байкамин”. Методика включена в аналитически-техническую документацию на препарат (проект ВФС).

Литература

  1. Бауэр Г., Энгельгард Х., Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии.— М.: Мир, 1988.— 688 с.
  2. Геккель К., Экштайн Х. Аналитические и препаративные лабораторные методы.— М.: Химия, 1994 —416 с.
  3. Полануер Б. М., Иванов С. В., Шолин А. Ф. Экспресс-анализ таурина в виде динитрофенильного производного методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в биологических объектах/Хим.-фармац. журнал.— 1995.— 29.— № 6.— С. 61–64.
  4. Хромова Т. О., Ізмайлова І. К., Васильченко Є. О., Ентіна Т. К., Ткаченко Є. М./Кореляція метаболічного ацидозу шляхом комбінованого застосування рослинних поліфенолів та амінокислот//VII Укр. біохімічний з‘їзд.— Київ, 1997.—Ч. ІІІ.— С. 33–34.
  5. Diaz Marot A., Monfort Tort E., Comellas Riera, Gassiot Matas M. Application dancilcloride and 1-ftor-2,4-dinitrobenzol in HPLC/Arinidad. –1988.— 45.—№ 417.— Р. 401–406.
  6. Molnar I., Horvath C. Definition аmino acids/LC & GC.— 1990.— 8. № 12.— Р. 958.
  7. Spackmann D. H., Stain W. H., Moore S. Derivatives, formed at response аmino acids with ningydrine/ Anal. Chem.— 1958.— 30.— № 10.— P. 1190.




© Провизор 1998–2017



Грипп у беременных и кормящих женщин
Актуально о профилактике, тактике и лечении

Грипп. Прививка от гриппа
Нужна ли вакцинация?
















Крем от морщин
Возможен ли эффект?
Лечение миомы матки
Как отличить ангину от фарингита






Журнал СТОМАТОЛОГ



џндекс.Њетрика