Логотип журнала "Провизор"








А. В. Шовковый, А. Т. Шеин

Исследование состава биологически активного природного вещества эсцин

Государственный научный центр лекарственных средств, г. Харьков

Настои и отвары из коры, листьев и плодов конского каштана (Aesculus Hippocastanum L.) с давних пор используются в народной медицине в качестве вяжущих, желчегонных средств [14], а также для лечения церебральных функциональных нарушений, вызванных отеками головного мозга, тяжелыми травматическими отеками после перелома, при профилактике и терапии постоперационных отеков, болевых синдромах позвоночника [3]. Разные части растения содержат в тех или иных количествах тритерпеновые гликозиды (эсцин), флавоноиды (рутин, кварцетин) и другие природные соединения [4]. Основным биологически активным веществом, входящим в состав плодов конского каштана, является эсцин [6].

Эсцин представляет собой смесь изомеров: a-, b-эсцина и криптоэсцина [13],— причем основным компонентом, определяющим биологическое действие эсцина, является b-эсцин. Поэтому определенный интерес представляет рассмотрение количественного состава различных промышленных образцов эсцина разных годов выпуска для выяснения количественного содержания b-эсцина в образцах.

В литературе описано несколько методов суммарного определения тритерпеновых гликозидов эсцина: потенциометрическое титрование [1]; спектрофотометрические методы, основанные на получении окрашенных продуктов с концентрированной серной кислотой [5], с хлоридом железа (III) [11], с хлоридом кобальта (II) [7, 8]. Описан также и колориметрический метод определения эсцина [9, 10].

Однако все эти методы не дают информации по отдельным компонентам вещества.

Цель работы — оценка качественного и количественного состава биологически активного природного вещества эсцин.

Для проведения исследования был выбран метод ВЭЖХ. Взяв за основу работу [12], в которой проведено исследование эсцина методом ВЭЖХ, нами были исследованы четыре серии эсцина производства ОАО «Галичфарм», полученного из различных партий конского каштана.

Точную навеску эсцина растворяли в метаноле, чтобы концентрация составляла 1 мг/мл.

Полученный раствор хроматографировали на жидкостном хроматографе в следующих условиях: колонка размером 3,9х150 мм, заполненная сорбентом Symmetry C18, с размером частиц 5мкм; детектирование при длине волны 210 нм; объем вводимой пробы 10 мкл; скорость подвижной фазы 1,0 мл/мин.; подвижная фаза ацетонитрил — раствор кислоты ортофосфорной (35:65); температура колонки — 250С.

Приготовление подвижной фазы. 350 мл ацетонитрила помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл прибавляют 600 мл воды, 10 мл 0,1 М раствора кислоты ортофосфорной, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Оборудование: жидкостный хроматограф фирмы Waters, состоящий из Waters 515 HPLC Pump, Waters 717 plus Autosampler, Waters 2487 Absorbence Detector.

Реактивы: Ацетонитрил для ВЭЖХ (ТУ 88-0205-091-002-94), спирт метиловый фармакопейного достоинства [2].

В результате измерений для каждого образца эсцина были получены хроматограммы.

Результаты измерений представлены в таблице 1, где сопоставлены относительные площади полученных пиков.

Таблица 1. Относительные площади пиков эсцина различных серий

Серия

Пик

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
111090 3,71 1,48 0,24 1,55 8,58 35,28 8,09 27,34 4,27 2,77 0,36 5,35 0,98
020796 2,40 1,23 0,29 1,86 9,95 34,69 8,23 23,50 5,13 0,47 0,89 1,06 5,67 4,63
010297 1,38 1,01 0,47 2,57 8,95 35,34 7,85 25,41 5,32 0,63 2,05 - 7,13 1,89
010598 1,96 1,41 0,37 1,74 9,87 33,76 7,12 25,60 4,13 0,18 4,76 4,71 4,39

За 100 % принята сумма пиков 1-14, полученных на хроматограмме

Как видно из приведенных в таблице значений, во всех сериях наблюдалось наличие пиков 1–9 и 13, 14. Пики 10 и 11 в серии 111090 и 11, 12 в серии 010598 идентифицировать по отдельности не удалось, поэтому представлены их суммарные площади, пик 12 в серии 010597 не обнаружен. Проведенные ранее исследования [12] показали, что b-эсцину принадлежат пики 5, 6, 7, 8. Расчет суммы этих пиков по отношению к сумме всех пиков, полученных в результате хроматографирования эсцина,— 100%, что свидетельствует о содержании в серии 111090 b-эсцина в количестве 79,29%, в серии 020796 — 76,37%, в серии 010297 — 77,55%, в серии 010598 — 76,35%. Из приведенных значений видно, что содержание b-эсцина в зависимости от серии изменяется незначительно — от 76,35% до 79,29% — и в среднем составляет 77,39%. Статистическая обработка результатов эксперимента представлена в таблице 2.

Таблица 2. Результаты статистической обработки результатов хроматограмм эсцина различных серий
Пик Хср S2 Sx Sx(ср.) DX DXср. e, %
1 2,36 0,98 0,99 0,49 3,15 1,58 66,7
2 1,28 0,44 0,21 0,10 0,67 0,33 26,0
3 0,34 0,01 0,10 0,05 0,32 0,16 46,6
4 1,93 0,20 0,45 0,22 1,42 0,71 36,7
5 9,34 0,46 0,68 0,34 2,16 1,08 11,5
6 34,77 0,54 0,73 0,37 2,33 1,17 3,4
7 7,28 0,24 0,49 0,25 1,57 0,78 10,0
8 25,46 2,47 1,57 0,79 4,99 2,49 9,8
9 4,71 0,36 0,59 0,29 1,91 0,95 20,2
10* 0,43 0,05 0,23 0,13 0,98 0,57 132,7
11** 1,47 0,67 0,82 0,58 10,4 7,37 501,1
12** 0,71 0,25 0,49 0,35 6,29 4,44 626,1
13 5,72 1,05 1,02 0,51 3,26 1,63 28,5
14 2,97 3,29 1,82 0,91 5,78 2,89 97,5

*расчет проведен по 3 значениям;
**расчет проведен по 2 значениям

На основании величины относительного стандартного отклонения эксперимента (e), рассчитанной для четырех серий по каждому из пиков, была проведена оценка постоянства состава эсцина каждой серии.

Как видно из представленных в таблице значений, для характерных b-эсцину пиков относительные стандартные отклонения результатов находятся в интервале 3,4–11,6%. На наш взгляд, эти результаты можно считать вполне приемлемыми по отношению к значениям стандартного отклонения других пиков, минимальное из которых составляет 20,2% для пика 9, а максимальное — 626,1% для пика 12. Эти данные еще раз подтверждают, что содержание b-эсцина в субстанции эсцина от серии к серии остается практически неизменным.

Выводы

  1. На основании полученных в результате эксперимента данных можно сделать вывод: независимо от серии эсцина содержание в нем b-эсцина остается практически постоянным (eср. = 8,7%) и составляет 77,39%.
  2. Наличие других компонентов также сохраняется от серии к серии, однако, судя по стандартным отклонениям результатов их определения (e), содержание компонентов значительно изменяется в зависимости от серии.

Литература

  1. Временная фармакопейная статья 42У-11/37-159-95. Эсцин
  2. Государственная Фармакопея СССР.— XI изд.— Вып. 2.— С. 103–133.
  3. Иванишин Д. С., Катина З. Ф., Рыбачук И. З. Лекарственные растения Украины.— Киев: Урожай, 1975.— 360 с.
  4. Рекламный проспект Reparilвв фирмы Madaus.
  5. Рыбаченко А. И., Башура А. Г. Хромато-спектрофотометрическое определение сапонина эсцина в аэрозольном препарате. Тезисы IV съезда фармацевтов.— Казань,1986.— С. 321.
  6. Сокольский И. Н. Химическое изучение некоторых активных полиокситерпеновых гликозидов. Автореф. дис. канд. фарм. наук.— М., 1976.— 20 С.
  7. ТУ 64-4-75-87. Семя конского каштана обыкновенного
  8. Царенко Н. Я., Сиренко Л. Я., Хухренский В. Г. Количественное определение эсцина в семени каштана конского. Тезисы докл. IV съезда фармацевтов УССР.— Запорожье, 1984.— С. 240.
  9. Dytkowska O., Zudwiski H. Oznaczanie eskuliny u escyny u intractum Hiphocastani//Acta Polon Pharm.,1973. – ХХХ.—№ 6.— S. 581–585.
  10. Karting F. und Hiermann A. Zen bestimnung kleinsta aescihmenger in Phlanzen organen//Pharm. Zenthalle, 1969.— Bs.108.— № 3.— S. 182–187.
  11. Schlenimer W. Und Bosse J. Zen quantitativen bestimnung von friterpenverbindungen mit halfe der Eisenchchlorid Reaction//Arch. der Pharm.— 1963.— Bs. 296.— № 11.— P. 785–791.
  12. Wagner H., Reger H., Baner R. Saponinhaltige Dragen und Fertigarzneimittel // Doutshe Apotheker Zeitung, 1985.— Bs. 125.— № 7.— S. 30.
  13. Wagner H., Schlenemer F., Hofmann B. Uber Inhalttsstoffe des Robkastahiensamen//Arzneimittel Forschuy, 1970.— Bs. 205.— S. 376–381
  14. Zozenz D. und Marek M. Das therapentish wirksane Prinzif der b-kastanie (Aesculies Hippocastanum)//Arzn. Forchung.— 1960.— Bs. 4.— S. 263–284.




© Провизор 1998–2017



Грипп у беременных и кормящих женщин
Актуально о профилактике, тактике и лечении

Грипп. Прививка от гриппа
Нужна ли вакцинация?
















Крем от морщин
Возможен ли эффект?
Лечение миомы матки
Как отличить ангину от фарингита






Журнал СТОМАТОЛОГ



џндекс.Њетрика