Логотип журнала "Провизор"








Т. В. Майстат, С. А. Тихонова, Е. А. Радченко

Результаты экспериментального и клинического изучения препарата “Прополтин” при коронавирусной инфекции

Харьковская медицинская академия последипломного обучения,
Харьковский институт микробиологии и иммунологии им. И. И. Мечникова,
Украинская фармацевтическая академия

Проблема поиска эффективных противовирусных препаратов обусловлена высокой заболеваемостью и широкой распространенностью вирусных инфекций.

Несмотря на интенсивный скрининг, проводимый во всем мире, количество противовирусных препаратов при ряде инфекций ограничено [6, 7].

Целью данного исследования явилось изучение антивирусной активности препарата “Прополтин” и его клинической эффективности при коронавирусной инфекции. Нами было проведено экспериментальное и клиническое изучение препарата “Прополтин”, полученного в лаборатории аптечной технологии лекарств Украинской фармацевтической академии под руководством академика А. И. Тихонова. В составе препарата содержится 50 мг фенольного гидрофильного препарата прополиса (ФГПП). Препарат разрешен к клинической апробации (Протокол № 2 Заседания Президиума Фармакологического Комитета МЗ Украины от 26.02.98 г.).

Экспериментальное исследование ФГПП проводилось в лаборатории вирусных инфекций ХНИИМИ им. И. И. Мечникова.

Исследованию были подвергнуты две серии ФГПП в виде сухого порошка.

В опытах использовали оригинальный штамм коронавируса Харьков/343/86 (А. С. № 1545616 от 22.10.89) [5].

Для определения максимально переносимой концентрации (МПК) и изучения антивирусной активности ФГПП были использованы следующие виды перевиваемых клеток человеческого и животного происхождения:

ПT — перевиваемые клетки почки эмбриона крупного рогатого скота;
Тr — перевиваемые клетки трахеи эмбриона крупного рогатого скота;
Нер-2 — перевиваемые клетки рака гортани человека;
Hela — перевиваемые клетки рака шейки матки человека.

Клетки выращивались в среде 199 с добавлением 10% бычьей сыворотки и антибиотиков (пенициллина и стрептомицина).

После удаления ростовой среды из пробирок с клеточным монослоем вносили по 0,2 мл различных концентраций ФГПП (0,5; 1,0 и 2,0%) и добавляли по 0,8 мл поддерживающей питательной среды 199 (без бычьей сыворотки). Пробирки с испытуемым раствором инкубировали при 37°С в течение 7–8 дней.

Контролем служили пробирки с культурами клеток, в которые не были добавлены изучаемые растворы препаратов.

Учет проводили по наличию или отсутствию цитотоксического действия на растущие клетки при просмотре в микроскопе при малом увеличении х10.

Степень цитотоксического действия определяли по изменению морфологии клеток (округление и сморщивание клеток, отторжение от стекла дегенерированных клеток) по четырехплюсовой системе от + до ++++.

МПК определяли по максимальному количеству ФГПП, не вызывающему цитотоксического действия на клетки.

Для изучения токсичности in vivo производили введение растворов препарата в дозе 0,2 мл в аллантоисную полость 9–10-дневных куриных эмбрионов (по 5 эмбрионов на каждое разведение ФГПП).

Через 24 и 48 часов инкубирования в термостате при 37°С их вскрывали и учитывали количество нормально развивающихся эмбрионов.

Противокоронавирусная активность ФГПП оценивалась в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с использованием 1% суспензии мышиных эритроцитов путем определения степени снижения гемагглютинирующей активности коронавирусов под влиянием препарата.

Контролями являлись:

  1. вирус в рабочей дозе (4 гемагглютинирующие единицы) без препарата;
  2. мышиные эритроциты в виде 1% суспензии.

Снижение гемагглютинирующей активности вирусов в 4 и более раз расценивали как действие препарата на гемагглютинины коронавируса.

Установление коронавирусной этиологии острых кишечных инфекций (ОКИ) у наблюдаемых больных осуществляли согласно Методическим рекомендациям [2].

Учитывая трудность и длительность изоляции коронавирусов непосредственно из клинического материала in vitro, был использован информативный метод диагностики с помощью реакции встречного иммуноэлектрофореза (РВИЭФ).

Постановку РВИЭФ со специфической сывороткой производили в аппарате ПЭФ-З. Материалом для исследования служила 10% суспензия фекалий больных на растворе Хэнкса или 0,15 М фосфатно-буферном растворе с рН 7,2. Для предотвращения размножения сопутствующей микрофлоры в каждую пробу после центрифугирования добавляли антибиотики (1000 ЕД/мл пенициллина, 1000 мкг/мл стрептомицина и 20–40 ЕД нистатина). Положительной реакцией установления коронавирусного антигена считали наличие на иммуноэлектрофореграмме линий преципитации между исследуемым инфекционным материалом больных ОКИ и специфической иммунной коронавирусной сывороткой.

Помимо вирусологического исследования всем больным проводился бактериологический анализ кала.

Клиническая эффективность препарата “Прополтин” была изучена у 20 больных (13 женщин и 7 мужчин) в возрасте от 16 до 70 лет, страдающих острым гастроэнтероколитом коронавирусной этиологии.

В контрольную группу вошли 20 пациентов с коронавирусной инфекцией, получавшие традиционное лечение (регидрон, дезинтоксикационная и симптоматическая терапия).

Препарат “Прополтин” назначался по 2 таблетки (0,1 г) 3 раза в день за 30 минут до приема пищи на фоне базисной терапии в течение 7 дней.

Результаты испытания водных растворов ФГПП на различных перевиваемых клетках представлены в таблице 1.

Таблица 1. Результаты изучения токсичности ФГПП на клетках различного происхождения
№№ серии Вид клеток Kонцентрация
препарата, %
Результат (токсичность)
1 сутки 2 сутки 5 сутки 7-8 сутки
1 ПТ 0,5 0 0 0 ±
1,0 0 0 ± ++
2,0 ++ +++ ++++ ++++
Tr 0,5 0 0 ± ++
1,0 0 0 ++ +++
2,0 ++ +++ ++++ ++++
Hela 0,5 0 0 ++ ++
1,0 0 0 ++ +++
2,0 ++ +++ ++++ ++++
Нер-2 0,5 0 0 ± ++
1,0 0 0 + +++
2,0 ++ +++ ++++ ++++
2 ПТ 0,5 0 0 ± +++
1,0 ++ +++ ++++ ++++
2,0 +++ +++ ++++ ++++
Tr 0,5 0 0 ± +++
1,0 ++ +++ ++++ ++++
2,0 +++ ++++ ++++ ++++
Hela 0,5 0 0 ± ++
1,0 ++ +++ ++++ ++++
2,0 +++ +++ ++++ ++++
Нер-2 0,5 0 0 ++ ++
1,0 ++ +++ ++++ ++++
2,0 +++ +++ ++++ ++++

Kонтроли клеток

ПТ 0 0 0 +
Тr 0 0 0 +
Hela 0 0 + ++
Нер-2 0 0 + ++

Примечание:

0 - отсутствие цитотоксичности;
±, + - ++++ - различная степень цитотоксичности.

Из таблицы следует, что 0,5 и 1,0% концентрации препарата ФГПП (серия № 1 ) не вызывали цитопатических повреждений ни в одной из примененных клеточных культур. Более высокая концентрация (2%) была токсичной для клеток. Это выражалось в появлении округлых с зернистой цитоплазмой клеток, которые отторгались от поверхности стекла. Вследствие этого нарушалась целостность клеточного монослоя.

Серия № 2 препарата в виде 1,0 и 2,0% концентрации вызывали дегенерацию клеток с нарушением целостности клеточного пласта уже на 2-й день после контакта препарата с клетками. Эта серия препарата могла быть использована для проверки противовирусной активности лишь только в виде 0,5% раствора.

При введении растворов ФГПП в аллантоисную полость 9–10-дневных куриных эмбрионов токсического влияния на их развитие через 24–48 часов инкубирования при 37°С не было выявлено.

Таким образом, для изучения в РТГА антивирусной активности в отношении коронавирусов были взяты 1% р-р ФГПП (серия № 1) и 0,5% р-р ФГПП (серия № 2).

Результаты испытания действия ФГПП на гемагглютинирующую активность коронавирусов представлены в таблице 2.

Таблица 2. Действие ФГПП на гемагглютинины коронавируса
Серии ФГПП Титр гемагглютининов до и после воздействия ФГПП на вирус
до после
Серия № 1 1:128 1:32-1:16
Серия № 2 1:128 1:128
Kонтроль коронавируса 1:128 1:128
Kонтроль эритроцитов Отсутствие гемагглютинации

Из таблицы следует, что 1,0% водный раствор серии № 1 ФГПП снижал титр коронавируса в 4–8 раз, что свидетельствует о перспективности его использования в лечении инфекций, вызываемых данным вирусом. Серия № 2 ФГПП не снижала гемагглютинирующей активности коронавируса.

Проведенные экспериментальные исследования в опытах in vitro и in vivo послужили основанием для создания препарата “Прополтин” на основе ФГПП.

Клиническая эффективность лечения препаратом “Прополтин” больных с коронавирусной инфекцией представлена в таблице 3.

Таблица 3. Частота выявления клинических симптомов у больных острым гастроэнтероколитом коронавирусной этиологии, леченных препаратом «Прополтин»
Kлинические симптомы Частота выявления симптомов,%
Испытуемая группа (п = 20) Kонтрольная группа (n = 20)
До лечения 4 день болезни При выписке из стационара До лечения 4 день болезни При выписке из стационара
Диарея 100 70 ± 9,68* - 100 95 ± 4,8** -
Боли в животе 90 ± 6,7 45 ± 11,12* - 95 ± 4,8 60 ± 10,9* -
Тошнота 70 ± 10,2 20 ± 8,94* - 60 ± 10,9 40 ± 10,9 -
Рвота 55 ± 11,12 5 ± 4,8* - 50 ± 11,8 15 ± 7,98* -
Урчание в кишечнике 80 ± 8,94 40 ± 10,9* 5 ± 4,8 90 ± 6,7 55 ± 11,12* 5 ± 4,8
Слабость 75 ± 9,68 40 ± 10,9* 5 ± 4,8 70 ± 11,18 50 ± 11,18 10 ± 4,8

Примечание:

* - достоверное различие показателей до лечения и на 4-й день болезни внутри групп;
** - достоверное различие показателей после лечения между испытуемой и контрольной группами.

Из таблицы видно, что препарат “Прополтин”, включенный в комплексную терапию больных острым гастроэнтероколитом коронавирусной этиологии, оказывает заметный терапевтический эффект уже на 4-й день болезни.

Очевидно, что частота выявления всех клинических симптомов в группе больных, получавших “Прополтин”, к 4 дню болезни достоверно снижалась (Р < 0,05).

В контрольной группе больных достоверное снижение частоты выявления отмечалось только по трем из шести изучаемых признаков: боли в животе, рвота, урчание в кишечнике.

Особый интерес представляет анализ данных, отражающих продолжительность диарейного синдрома у больных исследуемых групп. Результаты таблицы свидетельствуют о достоверном различии частоты выявления диареи на 4-й день болезни у больных исследуемой и контрольной групп (р < 0,05).

Сравнительный анализ остальных клинических симптомов продемонстрировал тенденцию их обратного развития в исследуемых группах больных (без достоверных различий).

Анализ бактериологического исследования кала у больных с коронавирусной инфекцией показал, что у 8 больных в испытуемой группе была выделена условно-патогенная микрофлора (у 5 больных — Kl. pneumonia, у 2 больных — Рг. vulgaris, у 1 больного — Ent. aerogenus). В контрольной группе у 10 больных выявлен следующий спектр флоры: у 7 больных — Kl. pneumoniae, у 2 больных — Acinetobacter, у 1 больного — Ent. aero-genus.

В результате проведенных исследований продемонстрирована эффективность применения препарата “Прополтин” у больных с коронавирусной инфекцией.

Обнаружение ассоциаций коронавирусов и условно-патогенной флоры у больных может являться предметом дальнейшего исследования их участия в патогенезе смешанных инфекций.

Препарат “Прополтин” в рекомендованных дозах (0,1 г 3 раза в день за 30 минут до еды) не оказывал побочных влияний, хорошо переносился пациентами, не вызывал аллергических реакций.

Выводы

  1. При экспериментальном исследовании серии № 1 ФГПП в виде 1,0% и серии № 2 в виде 0,5% водных растворов на различных видах перевиваемых клеток животного и человеческого происхождения (ПТ, Tr, Hela и Нер-2) установлено отсутствие токсических свойств.
  2. В опытах in vivo испытуемые концентрации (0,5; 0,1; 2,0%) ФГПП были безвредны для развивающихся 9–10-дневных куриных эмбрионов.
  3. Водный раствор ФГПП (серия № 1) снижал в 4–8 раз титр гемагглютининов коронавируса, что послужило основанием для создания антикоронавирусного препарата “Прополтин”.
  4. Клиническое наблюдение за больными коронавирусной инфекцией показало отсутствие осложнений и побочных явлений при назначении препарата “Прополтин” в дозе 0,1 г 3 раза в день.
  5. Клиническая эффективность препарата “Прополтин” при лечении больных ОКИ коронавирусной этиологии выражалась в уменьшении продолжительности диарейного синдрома.

Литература

  1. Иванская Н. В. Экспресс-диагностика вирусных инфекций (бакуло-4-коронавирусы)//Автореф. канд. дисс.— Киев.— 1991.
  2. Лабораторная диагностика коронавирусной острой кишечной инфекции//Методические рекомендации.— Харьков.— 1992.— 14 с.
  3. Панченко Л. О. Коронавірусна кишкова інфекція у дітей//Інфекційні хвороби.— Тернопіль.— 1997.— № 3.— С. 19–22.
  4. Панченко Л. О. Коронавірусна кишкова інфекція (Етіологія, діагностика, клініко-епідеміологічні паралелі у дітей)//Автореф. докт. дис.— Київ.— 1994.
  5. Штамм коронавируса Харьков/343/86 для диагностики коронавирусных кишечных инфекций (А. С. № 1545616 от 22.10.89 г).
  6. Galasso G. J., Whitley R. J. and Marigan T. S. In book: Antiviral agents and viral diseases of man// New York. 3 rd. Rawen press.— 1990.
  7. Gastroenteritis viruses. In book: Human virology; Ed. by L. Collier and J. Oxford//Oxford-New York-Tokyo.— 1996.— Р. 139–146.




© Провизор 1998–2017



Грипп у беременных и кормящих женщин
Актуально о профилактике, тактике и лечении

Грипп. Прививка от гриппа
Нужна ли вакцинация?
















Крем от морщин
Возможен ли эффект?
Лечение миомы матки
Как отличить ангину от фарингита






Журнал СТОМАТОЛОГ



џндекс.Њетрика