|
Т. В. Майстат, С. А. Тихонова, Е. А. Радченко Результаты экспериментального и клинического изучения препарата “Прополтин” при коронавирусной инфекцииХарьковская медицинская
академия последипломного обучения, Проблема поиска эффективных противовирусных препаратов обусловлена высокой заболеваемостью и широкой распространенностью вирусных инфекций. Несмотря на интенсивный скрининг, проводимый во всем мире, количество противовирусных препаратов при ряде инфекций ограничено [6, 7]. Целью данного исследования явилось изучение антивирусной активности препарата “Прополтин” и его клинической эффективности при коронавирусной инфекции. Нами было проведено экспериментальное и клиническое изучение препарата “Прополтин”, полученного в лаборатории аптечной технологии лекарств Украинской фармацевтической академии под руководством академика А. И. Тихонова. В составе препарата содержится 50 мг фенольного гидрофильного препарата прополиса (ФГПП). Препарат разрешен к клинической апробации (Протокол № 2 Заседания Президиума Фармакологического Комитета МЗ Украины от 26.02.98 г.). Экспериментальное исследование ФГПП проводилось в лаборатории вирусных инфекций ХНИИМИ им. И. И. Мечникова. Исследованию были подвергнуты две серии ФГПП в виде сухого порошка. В опытах использовали оригинальный штамм коронавируса Харьков/343/86 (А. С. № 1545616 от 22.10.89) [5]. Для определения максимально переносимой концентрации (МПК) и изучения антивирусной активности ФГПП были использованы следующие виды перевиваемых клеток человеческого и животного происхождения:
Клетки выращивались в среде 199 с добавлением 10% бычьей сыворотки и антибиотиков (пенициллина и стрептомицина). После удаления ростовой среды из пробирок с клеточным монослоем вносили по 0,2 мл различных концентраций ФГПП (0,5; 1,0 и 2,0%) и добавляли по 0,8 мл поддерживающей питательной среды 199 (без бычьей сыворотки). Пробирки с испытуемым раствором инкубировали при 37°С в течение 7–8 дней. Контролем служили пробирки с культурами клеток, в которые не были добавлены изучаемые растворы препаратов. Учет проводили по наличию или отсутствию цитотоксического действия на растущие клетки при просмотре в микроскопе при малом увеличении х10. Степень цитотоксического действия определяли по изменению морфологии клеток (округление и сморщивание клеток, отторжение от стекла дегенерированных клеток) по четырехплюсовой системе от + до ++++. МПК определяли по максимальному количеству ФГПП, не вызывающему цитотоксического действия на клетки. Для изучения токсичности in vivo производили введение растворов препарата в дозе 0,2 мл в аллантоисную полость 9–10-дневных куриных эмбрионов (по 5 эмбрионов на каждое разведение ФГПП). Через 24 и 48 часов инкубирования в термостате при 37°С их вскрывали и учитывали количество нормально развивающихся эмбрионов. Противокоронавирусная активность ФГПП оценивалась в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с использованием 1% суспензии мышиных эритроцитов путем определения степени снижения гемагглютинирующей активности коронавирусов под влиянием препарата. Контролями являлись:
Снижение гемагглютинирующей активности вирусов в 4 и более раз расценивали как действие препарата на гемагглютинины коронавируса. Установление коронавирусной этиологии острых кишечных инфекций (ОКИ) у наблюдаемых больных осуществляли согласно Методическим рекомендациям [2]. Учитывая трудность и длительность изоляции коронавирусов непосредственно из клинического материала in vitro, был использован информативный метод диагностики с помощью реакции встречного иммуноэлектрофореза (РВИЭФ). Постановку РВИЭФ со специфической сывороткой производили в аппарате ПЭФ-З. Материалом для исследования служила 10% суспензия фекалий больных на растворе Хэнкса или 0,15 М фосфатно-буферном растворе с рН 7,2. Для предотвращения размножения сопутствующей микрофлоры в каждую пробу после центрифугирования добавляли антибиотики (1000 ЕД/мл пенициллина, 1000 мкг/мл стрептомицина и 20–40 ЕД нистатина). Положительной реакцией установления коронавирусного антигена считали наличие на иммуноэлектрофореграмме линий преципитации между исследуемым инфекционным материалом больных ОКИ и специфической иммунной коронавирусной сывороткой. Помимо вирусологического исследования всем больным проводился бактериологический анализ кала. Клиническая эффективность препарата “Прополтин” была изучена у 20 больных (13 женщин и 7 мужчин) в возрасте от 16 до 70 лет, страдающих острым гастроэнтероколитом коронавирусной этиологии. В контрольную группу вошли 20 пациентов с коронавирусной инфекцией, получавшие традиционное лечение (регидрон, дезинтоксикационная и симптоматическая терапия). Препарат “Прополтин” назначался по 2 таблетки (0,1 г) 3 раза в день за 30 минут до приема пищи на фоне базисной терапии в течение 7 дней. Результаты испытания водных растворов ФГПП на различных перевиваемых клетках представлены в таблице 1.
Примечание:
Из таблицы следует, что 0,5 и 1,0% концентрации препарата ФГПП (серия № 1 ) не вызывали цитопатических повреждений ни в одной из примененных клеточных культур. Более высокая концентрация (2%) была токсичной для клеток. Это выражалось в появлении округлых с зернистой цитоплазмой клеток, которые отторгались от поверхности стекла. Вследствие этого нарушалась целостность клеточного монослоя. Серия № 2 препарата в виде 1,0 и 2,0% концентрации вызывали дегенерацию клеток с нарушением целостности клеточного пласта уже на 2-й день после контакта препарата с клетками. Эта серия препарата могла быть использована для проверки противовирусной активности лишь только в виде 0,5% раствора. При введении растворов ФГПП в аллантоисную полость 9–10-дневных куриных эмбрионов токсического влияния на их развитие через 24–48 часов инкубирования при 37°С не было выявлено. Таким образом, для изучения в РТГА антивирусной активности в отношении коронавирусов были взяты 1% р-р ФГПП (серия № 1) и 0,5% р-р ФГПП (серия № 2). Результаты испытания действия ФГПП на гемагглютинирующую активность коронавирусов представлены в таблице 2.
Из таблицы следует, что 1,0% водный раствор серии № 1 ФГПП снижал титр коронавируса в 4–8 раз, что свидетельствует о перспективности его использования в лечении инфекций, вызываемых данным вирусом. Серия № 2 ФГПП не снижала гемагглютинирующей активности коронавируса. Проведенные экспериментальные исследования в опытах in vitro и in vivo послужили основанием для создания препарата “Прополтин” на основе ФГПП. Клиническая эффективность лечения препаратом “Прополтин” больных с коронавирусной инфекцией представлена в таблице 3.
Примечание:
Из таблицы видно, что препарат “Прополтин”, включенный в комплексную терапию больных острым гастроэнтероколитом коронавирусной этиологии, оказывает заметный терапевтический эффект уже на 4-й день болезни. Очевидно, что частота выявления всех клинических симптомов в группе больных, получавших “Прополтин”, к 4 дню болезни достоверно снижалась (Р < 0,05). В контрольной группе больных достоверное снижение частоты выявления отмечалось только по трем из шести изучаемых признаков: боли в животе, рвота, урчание в кишечнике. Особый интерес представляет анализ данных, отражающих продолжительность диарейного синдрома у больных исследуемых групп. Результаты таблицы свидетельствуют о достоверном различии частоты выявления диареи на 4-й день болезни у больных исследуемой и контрольной групп (р < 0,05). Сравнительный анализ остальных клинических симптомов продемонстрировал тенденцию их обратного развития в исследуемых группах больных (без достоверных различий). Анализ бактериологического исследования кала у больных с коронавирусной инфекцией показал, что у 8 больных в испытуемой группе была выделена условно-патогенная микрофлора (у 5 больных — Kl. pneumonia, у 2 больных — Рг. vulgaris, у 1 больного — Ent. aerogenus). В контрольной группе у 10 больных выявлен следующий спектр флоры: у 7 больных — Kl. pneumoniae, у 2 больных — Acinetobacter, у 1 больного — Ent. aero-genus. В результате проведенных исследований продемонстрирована эффективность применения препарата “Прополтин” у больных с коронавирусной инфекцией. Обнаружение ассоциаций коронавирусов и условно-патогенной флоры у больных может являться предметом дальнейшего исследования их участия в патогенезе смешанных инфекций. Препарат “Прополтин” в рекомендованных дозах (0,1 г 3 раза в день за 30 минут до еды) не оказывал побочных влияний, хорошо переносился пациентами, не вызывал аллергических реакций. Выводы
Литература
© Провизор 1998–2022
|
Грипп. Прививка от гриппа
Нужна ли вакцинация?
Как и чем лечить кашель?
Безрецептурные лекарства при сухом и влажном кашле Устойчивость микробов к антибиотикам →
Помогает ли одежда из шелка лечить экзему?
Что лучше развивает ребёнка — книжки с картинками или с текстом? О безопасности автокресел для детей в возрасте от 4 до 12 лет
Аллергический ринит
Забеременеть в 40 Лечение бесплодия. Обзор существующих вариантов Аденома простаты. Как и чем лечить ? |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|